2025-08-23 01:31:52
宿主細(xì)胞蛋白(HCPs)是生物制品生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的關(guān)鍵工藝相關(guān)雜質(zhì)之一,可導(dǎo)致患者不良的免疫反應(yīng)、超敏反應(yīng),另外也存在導(dǎo)致產(chǎn)品蛋白的降解等問題,影響產(chǎn)品的**性和有效性,是一項(xiàng)關(guān)鍵質(zhì)控指標(biāo)。HCPs殘留檢測(cè)應(yīng)用常用的方法是ELISA法,操作簡(jiǎn)單、靈敏度高,通量較高,是HCPs殘留檢測(cè)的日常放行檢方法,各國(guó)藥典規(guī)定了用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行HCPs殘留檢測(cè)。然而,ELISA 方法檢測(cè)HCP殘留仍面臨諸多挑戰(zhàn)。在實(shí)際的工藝生產(chǎn)過程中,宿主來(lái)源、生產(chǎn)工藝、純化方式、生產(chǎn)規(guī)模等因素均可能對(duì)HCPs的種類及復(fù)雜性產(chǎn)生影響。 不同培養(yǎng)工藝和產(chǎn)物表達(dá)影響 HCP 的數(shù)量和生化復(fù)雜性。北京宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)常見問題分析
大腸桿菌具有遺傳性狀清晰,易于培養(yǎng)和控制,表達(dá)水平高,成本低,周期短等特點(diǎn),是優(yōu)先的經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng),K-12系列和B系列菌株是工業(yè)規(guī)模上常用于生物工程的E.coli細(xì)菌株。K-12菌種、所衍生出的DH5α、Top10、JM109等菌株,可用于大量生產(chǎn)質(zhì)粒DNA并進(jìn)一步制備細(xì)胞基因**產(chǎn)品和病毒載體類疫苗。源于B系的菌株,如BL21,更適用于高效轉(zhuǎn)染表達(dá)載體和常規(guī)蛋白的表達(dá),如:病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細(xì)胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物針對(duì)這兩種菌株的特點(diǎn),分別開發(fā)了E.coli表達(dá)菌HCP殘留檢測(cè)試劑盒和E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測(cè)試劑盒。 成都MDCK宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)湖州申科開發(fā)多種宿主 HCP 檢測(cè)試劑盒,提供抗體覆蓋率驗(yàn)證服務(wù)。
為了更好地控制工藝和保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定,各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)均要求提供使用的宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)ELISA試劑盒的抗體覆蓋率數(shù)據(jù)。一般需進(jìn)行覆蓋率分析的場(chǎng)景一般有以下幾種情況:①臨床II期后,若是繼續(xù)使用商品化試劑盒,則需要評(píng)估試劑盒抗體覆蓋率是否可以繼續(xù)用于質(zhì)量監(jiān)控;②臨床III期及以后階段,產(chǎn)品研究者開發(fā)了平臺(tái)化或工藝專屬型的HCP監(jiān)測(cè)方法,該類試劑盒在使用前要評(píng)估覆蓋率水平與商業(yè)化覆蓋水平的差異;③申報(bào)時(shí)沒有提交覆蓋率數(shù)據(jù),監(jiān)管機(jī)構(gòu)可能會(huì)對(duì)企業(yè)提出發(fā)補(bǔ)的要求;④產(chǎn)品上市后發(fā)生了包括生產(chǎn)場(chǎng)地變更,工藝變更,HCP分析方法變更等因素的變更,研究者則需要評(píng)估變更前后抗體覆蓋率水平的差異,以及該差異對(duì)藥品質(zhì)量與**帶來(lái)的影響。
宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)抗體覆蓋率評(píng)估:法規(guī)推薦的方法有兩大類:一類是傳統(tǒng)2D-WB法,另一類是基于抗體親和的免疫捕獲類方法。傳統(tǒng)2D-WB法存在需要蛋白變性,樣品需要前處理(破壞蛋白天然表位);轉(zhuǎn)膜效率低;易產(chǎn)生非特異性等缺陷,難以反映真實(shí)的覆蓋率水平。湖州申科自主開發(fā)了免疫磁珠捕獲分離技術(shù)(immunomagnetic beads separation,IMBS),利用免疫磁珠的半液態(tài)性質(zhì),可以在懸浮的條件下與HCP樣本充分混勻結(jié)合,整個(gè)過程蛋白無(wú)需變性,結(jié)合方式與ELISA檢測(cè)條件相似,可以獲得更真實(shí)的覆蓋率結(jié)果。 SHENTEK? AutoElisa-4K HCP 檢測(cè)自動(dòng)化系統(tǒng)可減少人為誤差,滿足 21 CFR Part 11 數(shù)據(jù)管理要求。
湖州申科采用免疫磁珠分離(IMBS)結(jié)合 2D 電泳或者 LC-MS 的方法評(píng)估抗體覆蓋率。IMBS主要流程包括多克隆抗體與磁珠偶聯(lián),磁珠未結(jié)合位點(diǎn)的封閉,HCP樣本與結(jié)合抗體的磁珠共同孵育,此過程中 HCP 抗體結(jié)合可以識(shí)別的 HCP,而未識(shí)別的 HCP 則通過后續(xù)洗滌步驟去除,再通過低 pH等洗脫條件收集抗體捕獲的HCP。該方法擁有 AAE(Antibody Affinity Extraction)免疫層析柱分離的所有優(yōu)點(diǎn),同時(shí)免疫磁珠可以在懸浮的條件下與 HCP樣品充分混勻結(jié)合,HCP結(jié)合效果更佳,由于采用磁珠吸附可以減少 HCP與填料的非特異性吸附,提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。 湖州申科生物目前已承接常見宿主類型的HCP定制化開發(fā),如期交付率達(dá)到**。成都MDCK宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)
湖州申科宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)產(chǎn)品幾乎覆蓋抗體、重組蛋白、疫苗及細(xì)胞基因**領(lǐng)域的頭部企業(yè)。北京宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)常見問題分析
湖州申科生物致力于提供符合嚴(yán)格法規(guī)要求的宿主細(xì)胞蛋白(HCP)ELISA檢測(cè)試劑盒。為確保產(chǎn)品滿足生物制品(如抗體藥、疫苗)申報(bào)(如IND/BLA)的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn),申科構(gòu)建了全流程依規(guī)開發(fā)的質(zhì)量體系:整個(gè)開發(fā)過程嚴(yán)格遵循ISO 13485質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并滿足用戶審計(jì)要求。其開發(fā)流程明確包含三個(gè)關(guān)鍵階段:①HCP殘留定量檢測(cè)參考品開發(fā):關(guān)鍵在于建立可靠的HCP抗原參考品,涵蓋抗原的表征、量值溯源與賦值、均一性和穩(wěn)定性考察等,確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性與代表性。②高質(zhì)量大批量抗體制備:通過優(yōu)化的HCP抗原動(dòng)物免疫策略,結(jié)合嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目贵w質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(如建立標(biāo)準(zhǔn)、覆蓋率驗(yàn)證)和穩(wěn)定的制備工藝,生產(chǎn)具有高特異性和廣覆蓋度的檢測(cè)抗體,保證檢測(cè)的特異性和靈敏度。③檢測(cè)體系開發(fā)及驗(yàn)證:進(jìn)行嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測(cè)體系開發(fā)與驗(yàn)證工作,其驗(yàn)證方案符合ICH指導(dǎo)原則及藥典關(guān)于分析方法驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)要求。同時(shí),嚴(yán)格執(zhí)行物料質(zhì)控,并在潔凈車間環(huán)境中進(jìn)行生產(chǎn),確保試劑盒方法的穩(wěn)健性、重現(xiàn)性與法規(guī)符合性。這一從抗原源頭到成品體系的標(biāo)準(zhǔn)化、合規(guī)化開發(fā)流程,是湖州申科HCP檢測(cè)產(chǎn)品品質(zhì)與可靠性的根本保障。 北京宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)常見問題分析