2025-08-19 06:36:16
畢赤酵母(Pichia pastoris)是第二代酵母表達(dá)系統(tǒng)中的代表性菌株,是美國FDA認(rèn)定的GRAS(Generally Recognized As Safe)微生物,具有表達(dá)水平高,產(chǎn)物活性好,培養(yǎng)成本低,易擴(kuò)大為工業(yè)化生產(chǎn)等特點(diǎn)。在生物制藥領(lǐng)域,酶制劑、胰島素、表皮生長因子、膠原蛋白等多種生物制劑已經(jīng)通過畢赤酵母系統(tǒng)進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)。與其他產(chǎn)品雜質(zhì)一樣,畢赤酵母宿主殘留蛋白(HCP)可能對(duì)生物制品的**性和有效性產(chǎn)生不利影響,因此在生產(chǎn)監(jiān)測(cè)、產(chǎn)品放行等過程中需要對(duì)其進(jìn)行定量研究并進(jìn)行嚴(yán)格控制。SHENTEK®畢赤酵母HCP殘留檢測(cè)試劑盒(一步酶聯(lián)免疫吸附法)是湖州申科生物自主研發(fā)、具有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的、實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵試劑全國產(chǎn)化的畢赤酵母HCP通用檢測(cè)試劑盒。本試劑盒適用于基于GS115、X33等在內(nèi)的畢赤酵母菌株生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白的定量檢測(cè),操作步驟少、快速,檢測(cè)專一性強(qiáng),性能穩(wěn)定可靠。 樣品與抗體的匹配程度對(duì)宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)的結(jié)果影響很大。成都E.coli表達(dá)菌宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)
美國藥典<1132>章節(jié) 和歐洲藥典<2.6.34>章節(jié)建議對(duì)于即將進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)的(臨床III期及以后)或生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的生物制品采用定制化ELISA試劑盒進(jìn)行宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè),原因可能是:①確保檢測(cè)方法可以充分覆蓋實(shí)際工藝產(chǎn)生的HCPs,避免漏檢關(guān)鍵雜質(zhì);②支持更準(zhǔn)確的免疫原性和**性評(píng)估;③提供真實(shí)的工藝表征數(shù)據(jù),而非推測(cè)數(shù)據(jù);④滿足商業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量控制的方法一致性。此外,對(duì)目前市場(chǎng)上常見的HCP ELISA商業(yè)化試劑盒進(jìn)行了測(cè)試,并與HCP ELISA定制化試劑盒進(jìn)行對(duì)比,實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同商業(yè)化試劑盒檢測(cè)同一樣品的檢測(cè)值差異大,且準(zhǔn)確性均低于定制化試劑盒,表明定制化試劑盒更能滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制所需。 成都E.coli表達(dá)菌宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)平臺(tái)型試劑盒適用于相近工藝產(chǎn)品線,可適用監(jiān)測(cè)不同產(chǎn)品 HCP 水平。
在宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)的分析方法中, ELISA方法是廣泛應(yīng)用的,并作為QC日常放行檢測(cè)的主要手段。ELISA方法相對(duì)簡單、精度良好,方便設(shè)定控制范圍和建立技術(shù)規(guī)范,適用于產(chǎn)品開發(fā)和過程控制;但ELISA方法檢測(cè)依靠抗原抗體特異性結(jié)合,因此用存在于生物制品中的HCPs作為免疫原生產(chǎn)出的抗體質(zhì)量至關(guān)重要。無論是商品化ELISA試劑盒,還是自制的多克隆抗體,如果抗體的特異性和適用性不夠高,都有可能帶來HCPs漏檢的風(fēng)險(xiǎn),從而對(duì)生物制品質(zhì)量**帶來風(fēng)險(xiǎn)。除此之外,ELISA檢測(cè)HCPs使用多克隆抗體,無法針對(duì)性的提供高風(fēng)險(xiǎn)HCPs殘留蛋白真實(shí)存在情況。
大腸埃希氏菌(Escherichia coli,E. coli )又稱大腸桿菌,其作為模式微生物被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究中。大腸桿菌是表達(dá)藥用異源蛋白的常用微生物,在被批準(zhǔn)的藥用蛋白中,大約30%的產(chǎn)品以大腸桿菌作為表達(dá)宿主菌。與其他表達(dá)平臺(tái)一樣,盡管下游復(fù)雜的純化步驟已經(jīng)去除了大量的雜質(zhì),但終產(chǎn)品中仍會(huì)存在HCP殘留風(fēng)險(xiǎn),必須對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制,使其符合放行標(biāo)準(zhǔn)。湖州申科生物E.coli表達(dá)菌HCP殘留檢測(cè)試劑盒用于大腸桿菌表達(dá)菌株BL21來源的宿主細(xì)胞蛋白定量檢測(cè),適用于重組蛋白類產(chǎn)品的工藝中間品和原液類樣品,如白細(xì)胞介素(IL)、干擾素(rhIFN)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、腫瘤壞死因子(rhTNF)、促生長因子(EGF/FGF/PDGF)等。試劑盒檢測(cè)步驟少,快速,專一性強(qiáng),性能穩(wěn)定可靠。 湖州申科生物目前已承接常見宿主類型的HCP定制化開發(fā),如期交付率達(dá)到**。
全球快速增長的抗體、蛋白類藥物等生物藥由相應(yīng)工程細(xì)胞生產(chǎn)。生物制品藥物生產(chǎn)過程中的宿主內(nèi)源性蛋白,被稱為宿主細(xì)胞蛋白(Host Cell Proteins, HCPs)會(huì)隨著不同工藝流程部分殘留在藥物中。宿主細(xì)胞殘留蛋白作為外源蛋白可能會(huì)在不同程度上引發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答,導(dǎo)致過敏反應(yīng)或其它不良反應(yīng);另外還有一些殘留HCPs具有蛋白酶或脂酶的活性,可能導(dǎo)致蛋白藥物或輔料的降解,進(jìn)而增加藥物產(chǎn)品的質(zhì)量和療效的不穩(wěn)定性?;诖耍瑢?duì)藥物中HCPs的定性與定量檢測(cè)就顯得尤為重要。全球各國藥典如美國藥典,歐洲藥典以及中國藥典都對(duì)HCPs檢測(cè)提出了具體要求和標(biāo)準(zhǔn)。 湖州申科系列HCP檢測(cè)產(chǎn)品均進(jìn)行了校準(zhǔn)品的表征分析,抗體覆蓋率分析。成都疫苗產(chǎn)品用宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)抗體覆蓋率驗(yàn)證
湖州申科建立宿主特異 HCP 數(shù)據(jù)庫,支持高風(fēng)險(xiǎn)蛋白準(zhǔn)確鑒定與分析。成都E.coli表達(dá)菌宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)
按照美國藥典1132章節(jié)的要求,HCPs校準(zhǔn)品需滿足代表性要求,即能覆蓋實(shí)際工藝產(chǎn)品生產(chǎn)中的HCPs。從HCP免疫檢測(cè)方法使用目的和預(yù)期風(fēng)險(xiǎn)管理要求考慮,滿足工藝開發(fā)和驗(yàn)證,同時(shí)為了應(yīng)對(duì)下游工藝中潛在的異常工藝失效,或工藝變更需求,建議采用上游發(fā)酵工藝末端,如澄清處理后工藝點(diǎn)的樣本作為HCPs的來源。在實(shí)際制備中,可采用空細(xì)胞或空載細(xì)胞在模擬實(shí)際工藝的預(yù)定條件進(jìn)行采集,通過二維電泳或高分辨率質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學(xué)方法進(jìn)行模擬工藝和實(shí)際工藝下HCPs的代表性表征分析。越靠近下游HCPs蛋白種類越少,也越接近DS中HCPs,但是其可能無法滿足工藝開發(fā)和驗(yàn)證需求,也無法保證工藝的潛在風(fēng)險(xiǎn),往往不推薦使用,或只作為上游工藝HCPs免疫檢測(cè)法的輔助使用。 成都E.coli表達(dá)菌宿主細(xì)胞蛋白(HCP)殘留檢測(cè)