免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體

免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后，從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

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免疫組化常用的染色方法

根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法常用。 免疫組化檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)！山東靠譜免疫組化外包

細(xì)胞爬片免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟

1、選擇貼壁良好的細(xì)胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。

4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

5、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

6、PBS洗3次，每次5min。

英瀚斯生物，細(xì)胞、動(dòng)物、臨床樣本免疫組化檢測(cè)都可完成！

7、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗，4℃孵育50min。

8、PBS洗3次，每次5min。

9、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

10、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍(lán)，流水沖洗。

11、切片經(jīng)過梯度酒精（70-**）10min一個(gè)梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 什么是免疫組化怎么選擇免疫組化IHC詳細(xì)介紹！

免疫組化在在病理診斷中，隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來越多的新型抗體的出現(xiàn)，免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷、分類、預(yù)后判斷等方面產(chǎn)生了重大的影響。由于免疫組化技術(shù)也存在一些局限性，因此，深入研究免疫組化原理和技術(shù)，并努力實(shí)現(xiàn)規(guī)范化的操作，才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預(yù)后、指導(dǎo)臨床**中的作用。

觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況，對(duì)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)，由于抗原與抗體特異性結(jié)合，因此通過免疫組化使標(biāo)記抗體的顯色劑(酶、熒光素、同位素、金屬離子等等)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))。IHC所用標(biāo)本主要為兩大類:組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本，其中制作組織標(biāo)本更常用、更基本的方法是石蠟切片。石蠟切片對(duì)于組織形態(tài)保存好，有利于各種染色對(duì)照觀察，而且能長(zhǎng)期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標(biāo)本制作方法。

免疫組化結(jié)果要如何分析？

 （1）陽性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法。在40*光鏡下，隨機(jī)選擇不重疊的10個(gè)視野，機(jī)器或人工計(jì)數(shù)陽性著色細(xì)胞，每組3~6張不同動(dòng)物組織切片，然后進(jìn)行組間比較即可。

（2）灰密度分析法?？梢酝ㄟ^在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進(jìn)行灰密度分析，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析即可。

（3）評(píng)分法。用光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽性范圍進(jìn)行評(píng)分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~**），**終可以分?jǐn)?shù)相加，再進(jìn)行比較。對(duì)于以上這幾種方法，各有利弊，請(qǐng)細(xì)心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。

英瀚斯生物，專業(yè)病理染色團(tuán)隊(duì)，不止做檢測(cè)，還有專業(yè)病理分析。 英瀚斯生物，可做免疫組化定量分析。

免疫組化的結(jié)果分析：

免疫組化實(shí)驗(yàn)通常需要設(shè)置陽性對(duì)照、陰性對(duì)照（或替代對(duì)照）（陽性對(duì)照是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無問題；陰性對(duì)照與替代對(duì)照是排除有無非特異性染色）。一般情況下，陽性對(duì)照顏色的特點(diǎn)為：Ag定位，包漿、胞核、胞膜、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。且染色的強(qiáng)度不同（顏色深淺不一）；陰性對(duì)照的特點(diǎn)為：染色細(xì)胞與組織無區(qū)別，顏色具有彌散性，分布均勻。

英瀚斯生物可承接各類病理染色，包括免疫組化。

說明：免疫組化實(shí)驗(yàn)可以對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析，但要實(shí)驗(yàn)得到的必須是高質(zhì)量的染色切片，要求背景染色淺且特異性染色較深，這樣分析的結(jié)果才會(huì)比較準(zhǔn)確。 英瀚斯生物做免疫組化怎么樣？什么是免疫組化怎么選擇

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免疫組化的定量分析怎么做？

免疫組化的定量分析是通過圖像分析軟件對(duì)顯色結(jié)果進(jìn)行定量評(píng)估。免疫組化常用的方法有光密度分析和陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)。光密度分析是通過測(cè)量顯**域的光密度值，評(píng)估目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。免疫組化陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)是通過計(jì)數(shù)顯色陽性的細(xì)胞數(shù)量，評(píng)估目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。定量分析需要考慮多個(gè)因素，如顯色強(qiáng)度、背景信號(hào)和切片厚度。此外，免疫組化定量分析的結(jié)果通常只能進(jìn)行半定量分析，不能提供***的定量數(shù)據(jù)。 山東靠譜免疫組化外包