C18色譜柱問題
懸賞分：20|
新買的C18色譜柱，**次用時(shí)塔板數(shù)在2萬以上。保存后隔了4天再用，同一樣品塔板數(shù)掉到幾百，而且峰型和保留時(shí)間變化很大，不明白是什么原因，望高手指點(diǎn)！
你怎么保存的？
用的時(shí)候不能用酸性堿性過強(qiáng)的流動(dòng)相，用完后一定要用有機(jī)相和水相梯度沖洗幾遍（可能的話直接沖過夜），尤其是你用的流動(dòng)相有酸、堿、緩沖液、鹽等東西的時(shí)候一定要換成蒸餾水好好沖洗。
另外最后保存的時(shí)候一定要把柱子里灌滿有機(jī)溶解（甲醇或乙腈），沖至平衡，一定不能留水在里面（尤其是酸性的水液）。
20個(gè)柱體積不夠，你是不是用酸堿鹽了？你最好用甲醇（乙腈）-水 梯度100%-10% （每次梯度至少20min）反復(fù)洗滌，另外用乙腈保存比甲醇好。
用的時(shí)候不能用酸性堿性過強(qiáng)的流動(dòng)相，用完后一定要用有機(jī)相和水相梯度沖洗幾遍（可能的話直接沖過夜），尤其是你用的流動(dòng)相有酸、堿、緩沖液、鹽等東西的時(shí)候一定要換成蒸餾水好好沖洗。
另外最后保存的時(shí)候一定要把柱子里灌滿有機(jī)溶解（甲醇或乙腈），沖至平衡，一定不能留水在里面（尤其是酸性的水液）。
20個(gè)柱體積不夠，你是不是用酸堿鹽了？你最好用甲醇（乙腈）-水 梯度100%-10% （每次梯度至少20min）反復(fù)洗滌，另外用乙腈保存比甲醇好。
好
不好其 他 回 答共3條
1樓
應(yīng)該沒有那么復(fù)雜，就本人的經(jīng)驗(yàn)，向你提供幾種可能：
1. 柱子連接問題，柱頭留了較大的死體積，形成兩次展寬——解決辦法，重新連接柱子；
2. 如果保留時(shí)間大幅提前，則可能是10%的甲醇沖的時(shí)間太長(zhǎng)了，形成疏水塌陷——解決辦法，用甲醇和乙腈交替沖柱，各10倍柱體積就行了，反復(fù)2次；
3. 流動(dòng)相里混進(jìn)了堿，柱子報(bào)廢——解決辦法，換柱子；
4. 做的樣品是蛋白質(zhì)、多肽等大分子物質(zhì)，因在柱上吸附致柱效下降——解決辦法，用0.1%TFA（水）和0.1%TFA（乙腈：異丙醇（1：2）），倒沖，跑0-100%的梯度3次；（這種情況下應(yīng)該用300埃的柱子，90埃的容易堵）；
5. 操作錯(cuò)誤，如流動(dòng)相用錯(cuò)等——解決辦法，仔細(xì)核對(duì)色譜條件；
就這么多了，希望能有幫助，也希望知道真實(shí)原因。
1. 柱子連接問題，柱頭留了較大的死體積，形成兩次展寬——解決辦法，重新連接柱子；
2. 如果保留時(shí)間大幅提前，則可能是10%的甲醇沖的時(shí)間太長(zhǎng)了，形成疏水塌陷——解決辦法，用甲醇和乙腈交替沖柱，各10倍柱體積就行了，反復(fù)2次；
3. 流動(dòng)相里混進(jìn)了堿，柱子報(bào)廢——解決辦法，換柱子；
4. 做的樣品是蛋白質(zhì)、多肽等大分子物質(zhì)，因在柱上吸附致柱效下降——解決辦法，用0.1%TFA（水）和0.1%TFA（乙腈：異丙醇（1：2）），倒沖，跑0-100%的梯度3次；（這種情況下應(yīng)該用300埃的柱子，90埃的容易堵）；
5. 操作錯(cuò)誤，如流動(dòng)相用錯(cuò)等——解決辦法，仔細(xì)核對(duì)色譜條件；
就這么多了，希望能有幫助，也希望知道真實(shí)原因。
2樓
新買色譜柱需要看廠家出廠的時(shí)候用什么溶劑保存的額，再進(jìn)行相應(yīng)的處理，使用，保存，正常情況下最好用甲醇與水比例八十五比十五的比例保存的，純有機(jī)相容易揮發(fā)的，即使你密封兩端了
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